沒有IRT的DNA會很臟

很多研究者因樣品DNA很臟，轉而求助于我們。問題樣品主要集中在土壤、糞便和血液。樣品富含腐植酸、多糖類、亞鐵血紅素和色素等，與DNA交聯嚴重抑制下游PCR擴增等酶實驗和測序。MO BIO擁有一項專利抑制因子去除技術® （IRT），應用在多款試劑盒上能高效去除抑制因子卻極少影響DNA得率。這項技術真的有用嗎？負責任的研究者需要看到實驗數據。最近我們接到下面的一個問題：

Q：你們有使用與不使用抑制因子去除技術® （IRT）提取DNA的質量對比數據嗎？

答案是有的。我們已經做了一系列的質量評估工作，證明了提取環境樣品DNA的過程中使用IRT技術的重要性。一篇總結性文章曾發表于ASM 2010年年會（可致電：0755-8348 9872索�。�。使用含IRT技術的MO BIO PowerSoil® DNA Isolation Kit，與不含IRT技術的競爭品牌試劑盒，提取0.1g堆肥做對比試驗。最終DNA用分光光度法和凝膠電泳分析作初步分析，然后用通用引物16S rRNA，KAPA2G Fast HotStart Readymix酶跑end-point PCR。下圖（圖3A）展示DNA純度曲線和凝膠電泳結果。圖3B展示最終DNA的吸光值。值得注意的是，競爭對手試劑盒提取的DNA A260讀數較高，表面上看起來得率是PowerSoil® Kit（P）的兩倍，然而進一步的凝膠電泳能看到多出部分的DNA源于大量腐植酸污染（低230/260比值加上高340讀數，圖3B），以及回收的大量降解RNA（圖3A）。后面的PCR擴增再次確認存在抑制因子。

再來一個實驗對比我們的兩款試劑盒效果；一款含IRT技術（PowerWater® ），另一款不含IRT技術（RapidWater® ）。

 

除了IRT技術，其它都一樣。圖4A展示最終DNA得率差不多，而使用IRT技術的DNA Real-time PCR結果Cq

值更低和劃一。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

光肉眼是看不出DNA臟與不臟的！就這個水樣DNA來說，盡管分光光度法測純度表明很干凈，結果qPCR結果還是非常不能令人滿意。

雖然不是說有的樣品像這個水樣一樣棘手，但是無論你做的是什么類型樣品，MO BIO總有方法提取它。有了IRT技術，擴增成功率更有保障！

MO BIO的DNA和RNA提取試劑盒中，下列產品使用了IRT技術： PowerBiofilm™、 PowerSoil® 、PowerMax® 、PowerPlant® Pro、PowerClean® 、PowerWater® 、PowerFood® 及 BiOstic® Bacteremia DNA Isolation Kit。